بهینه سازی شرایط انجام rt-pcr به منظور ارزیابی بیان ژن های پراکسیزومی کاتالاز و pex۳ در مقایسه با ژن های پرتوانی nanog و oct۴ در سلول های بنیادی

نویسندگان

مرضیه موج بافان

marzieh mojbafan biology department, school of sciences, university of isfahan, isfahan, iran1- دانشگاه اصفهان، دانشکده علوم، گروه زیست شناسی، اصفهان، ایران کامران قائدی

kamran ghaedi biology department, school of sciences, university of isfahan, isfahan, iran / department of cell and molecular biology, royan institute for animal biotechnology, acecr, isfahan, iranدانشگاه اصفهان، دانشکده علوم، گروه زیست شناسی، اصفهان، ایران / پژوهشکده رویان، مرکز تحقیقات علوم سلولی جهاد دانشگاهی، گروه زیست شناسی سلولی و مولکولی، اصفهان، ایران شهناز رضوی

shahnaz razavi department of anatomy, school of medicine, isfahan university of medical sciences, isfahan, iranدانشگاه علوم پزشکی اصفهان، دانشکده پزشکی، گروه آناتومی، اصفهان، ایران سمیه تنهایی

somayeh tanhaie biology department, school of sciences, university of isfahan, isfahan, iranپژوهشکده رویان، مرکز تحقیقات علوم سلولی جهاد دانشگاهی، گروه زیست شناسی سلولی و مولکولی، اصفهان، ایران فرزانه ربیعی

چکیده

پراکسیزوم ها اندامک هایی هستند که در تمام یوکاریوت ها یافت می شوند و در متابولیسم اسیدهای چرب و دیگر متابولیت ها شرکت دارند. به منظور بررسی نیمرخ بیان دو ژن پراکسیزومی (کاتالاز و pex3) در طول عصب زایی، به بررسی نیمه کمی بیان این دو ژن در مقایسه با شاخص های ژنی سلول های بنیادی (oct4 و nanog) در سلول های p19 پرداختیم. در این تحقیق، ما از سلول های p19 استفاده کردیم که سلول های مناسبی برای مطالعات عصب زایی هستند. به علاوه، دو ژن متفاوت پراکسیزومی برای تعقیب کینتیک ساخت پروتئین ماتریکس پراکسیزومی (کاتالاز) و نیز ساخت پروتئین های غشائی پراکسیزومی (pex3p) انتخاب شدند. ابتدا rna از سلول های p19 استخراج و بعد، از آن برای ساخت cdna استفاده شد. پرایمرهای اختصاصی برای cdna مربوط به oct4، nanog، pex3 و کاتالاز توسط rt-pcr، برای بررسی کمی، تکثیر شدند. پارامترهای مختلفی جهت بهینه سازی شرایط pcr برای هر ژن، تغییر یافت. نمونه ای از شرایط مطالعه به این صورت است: نوار مربوط به ژن pex3 پس از 35 چرخه rt-pcr و در دمایی بین 5/52 تا 1/55 درجه سانتی گراد، به صورت مشخص دیده شد، در حالی که در rt- pcr نوار مشخص کاتالاز پس از 30 چرخه و در محدوده دمایی بین 7/52 تا 55 درجه سانتی گراد دیده شد. cdna مربوط به nanog پس از 36 چرخه و در دمای اتصالی بین 1/60 تا 1/64 درجه سانتی گراد تکثیر یافت و نوار مربوط به rt-pcr ژن oct4 پس از 28 چرخه و در محدوده دمایی بین 4/53 تا 57 درجه سانتی گراد دیده شد. به علاوه، تفاوت میان شدت فلوئورسانت هر نوار به منظور بررسی تفاوت بیان ژن های ذکرشده در سلول های p19 مقایسه شد.

برای دانلود باید عضویت طلایی داشته باشید

برای دانلود متن کامل این مقاله و بیش از 32 میلیون مقاله دیگر ابتدا ثبت نام کنید

اگر عضو سایت هستید لطفا وارد حساب کاربری خود شوید

منابع مشابه

مقایسه تأثیر وضعیت طاق باز و دمر بر وضعیت تنفسی نوزادان نارس مبتلا به سندرم دیسترس تنفسی حاد تحت درمان با پروتکل Insure

کچ ی هد پ ی ش مز ی هن ه و فد : ساسا د مردنس رد نامرد ي سفنت سرتس ي ظنت نادازون داح ي سکا لدابت م ي و نژ د ي سکا ي د هدوب نبرک تسا طسوت هک کبس اـه ي ناـمرد ي فلتخم ي هلمجزا لکتورپ INSURE ماجنا م ي دوش ا اذل . ي هعلاطم ن فدهاب اقم ي هس عضو ي ت اه ي ندب ي عضو رب رمد و زاب قاط ي سفنت ت ي هـب لاتـبم سراـن نادازون ردنس د م ي سفنت سرتس ي لکتورپ اب نامرد تحت داح INSURE ماجنا درگ ...

متن کامل

کلون سازی و بررسی بیان ژن nlpD اسینتوباکتر بومانی در سلول های HDF انسان به روش RT-PCR

سابقه و هدف: اسینتوباکتر بومانی یکی از باکتری­ های بسیار مقاوم در برابر انواع آنتی­ بیوتیک ­ها در جهان است. این باکتری عامل عفونت­ های بیمارستانی به صورت بومی یا همه­ گیر بوده و هنوز واکسن موثری علیه آن وجود ندارد. NlpD یکی از عوامل آنتی­ ژنی مهم است که سبب تحریک سیستم ایمنی میزبان می­ گردد. بنابراین، هدف از این تحقیق، کلون­سازی و بررسی بیان ژن nlpD باکتری اسینتوباکتر بومانی در سلول­ های HDF (H...

متن کامل

مقایسه سلول های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان، چربی و القایی از نظر بیان ژن های پرتوانی

سابقه و هدف: با وجود پیشرفت های گسترده در زمینه ی کشت سلول های بنیادی، هنوز انتخاب بهترین منبع سلولی کارآمد جهت تزریق، قابل تأمل است. از آنجا که میزان بیان ژن های پرتوان، نشان دهنده ی درجه ی کارآمدی سلول های بنیادی است، در این تحقیق بیان برخی از ژن های پرتوان از جمله c-myc، klf-4، oct4 و sox-2 در سلول های بنیادی به دست آمده از سه منبع بافت چربی، مغز استخوان و القایی، مورد مقایسه قرار گرفت. مواد...

متن کامل

ارزیابی بیان ژن هموباکس دئودنال 1 در سلول های تولید کننده انسولین، مشتق از سلول های بنیادی کارسینومای جنینی

زمینه و هدف: درک عملکرد سلول های بتا در سطح مولکولی به احتمال زیاد توسعه تکنیک های تولید سلول های بتا را تسهیل می کند. این مطالعه با هدف بررسی بیان ژن هومئوباکس دئودنال 1 (pdx-1) در سلول‌های تمایز یافته طراحی و اجرا شد. روش بررسی: این مطالعه بنیادی-کاربردی بر روی تمایز سلول‌های بنیادی به سلول‌های انسولین‌ساز انجام گرفت. محیط ثانویه حاصل از کشت پانکراس نوزاد یک هفته‌ای موش برای تمایز سلول‌های P...

متن کامل

اثر شدت تمرین اینتروال بر بیان ژن سلول های پیش ساز اندوتلیال و سلول های بنیادی قلب رت های مسن

مقدمه: افزایش سن با تغییرات آناتومیک و فیزیولوژیک اکثر بافت ‌ها و ارگان‌ های بدن به ویژه کاهش سلول ‌ها، بافت‌ ها و سطوح عروقی همراه است. سلول ‌های پیش ساز اندوتلیال در جلوگیری از اختلال عملکرد اندوتلیال و افزایش فرآیند نورگزایی نقش دارند. سلول های بنیادی قلبی نیز در ترمیم و بازسازی بافت قلب موثرند. تمرین منظم ورزشی موجب افزایش هر دو این سلول ها می شود. این مطالعه با هدف بررسی اثر هشت هفته تمرین...

متن کامل

بررسی بیان نشانگرهای اختصاصی پرتوانی oct۴ و nanog در بلاستوسیست های موش حاصل از لقاح آزمایشگاهی

سابقه و هدف: اگرچه امروزه ivf به عنوان یک تکنیک پرکاربرد در درمان ناباروری می­باشد، اما مطابق مطالعات صورت گرفته، استرس ایجاد شده به واسطه­ی تغییرات اسمزی، اکسیژن، دما و ph در شرایط خارج از رحم می­تواند باعث تغییرات مورفولوژیکی، ژنتیکی و اپی­ژنتیکی در جنین­های برون­تنی نسبت به حالت درون­تنی ­گردد. هدف از این مطالعه، بررسی تاثیر ivf بر کیفیت جنین­ها از طریق ارزیابی نرخ زنده­مانی و رشد و هم­چنین ...

متن کامل

منابع من

با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید


عنوان ژورنال:
genetics in the 3rd millennium

جلد ۷، شماره ۴، صفحات ۱۸۵۶-۱۸۶۳

میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com

copyright © 2015-2023